猪瘟、口蹄疫、伪狂犬、蓝耳病、圆环病毒 ---抗体效价金标快速检测试纸
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    猪瘟、口蹄疫、伪狂犬、蓝耳病是危害我国养猪业的极大传染病，究其原因,主要是因为免疫失败和免疫空白,免疫失败的原因主要是疫苗质量欠佳和疫苗冷藏不当,免疫程序不当,免疫抑制病毒的存在,猪体免疫功能下降等,造成猪只体内没有足够的免疫抗体来抵抗猪瘟、口蹄疫等强毒的攻击而发生这些病毒病,要减少猪瘟病的发生和流行,除加强猪场的隔离消毒,减少环境中的病毒,还必须制定合理的免疫程序,使猪体内常期保持抵抗猪瘟、口蹄疫、伪狂犬等强毒攻击的有效抗体.要了解猪体内的有效抗体水平,就必须开展猪免疫抗体水平监测.

目前国内对猪瘟抗体水平检测方法有:ELISA检测法,DOT-ELISA检测法和液体猪瘟正向间接血凝法；口蹄疫抗体检测方法主要有：正向间接红细胞凝集试验（间接血凝试验）、微量补体结合试验、酶联免疫吸附试验（ELISA）等；伪狂犬病的抗体水平检测主要有：琼脂免疫扩散试验、病毒血凝（HA）与血凝抑制（HI）试验等。这些方法虽然都具有微量,特异的优点,但需要条件较好,设备齐全的实验室和经过专门训练,具备兽医微生物专业技术水平较高的人员操作,一次检测至少需要4个小时。虽然近年来也有一些快速检测技术问世，如：伪狂犬、细小病毒乳胶凝集试验等，但是这些方法只可做定性检测，如伪狂犬检测只能测出是阴性或是阳性，即是否有抗体存在，若有抗体存在（阳性反应）抗体效价水平是多少则不得而知。像这样只可定性而不能定量的检测在实际养殖生产中是没有任何意义的。从当前中国养猪生产的实际情况看，绝大多数的种猪场、规模化养猪场及基层兽医工作人员对猪瘟、伪狂犬、口蹄疫等病毒病的疫苗免疫都非常重视，但是，疫苗本身的效价如何，防疫后猪只是否产生了相应的抗体，抗体水平具体是多少，却是一个未知数。导致免疫失败的因素非常之多，如：2003-2004年玉米大范围出现的霉变情况导致的霉菌毒素综合症使得猪只免疫抑制综合症大量出现，免疫功能的下降 ，使得许多猪场尽管打了疫苗，却根本不起作用。由此来看，只重防疫，而不进行抗体效价水平检测是非常盲目的，只能起到一个心理安慰“我打过疫苗了，起不起作用说不清”。

   郑州牧专李决教授畜禽医院经过多年努力，运用胶体金免疫层析技术及现代生化制备技术，与国内外诸多兽医微生物实验室及专业人士通力合作，成功研发---猪瘟、口蹄疫、伪狂犬、蓝耳病抗体免疫金标快速检测试纸，服务中国养猪生产。本文就针对抗体检测试纸作如下介绍：

一．原理：（以猪瘟为例）本试纸采用酶联免疫原理和胶体金层析技术制成快速检测猪血清中的猪瘟抗体。将猪瘟抗原包被在硝酸纤维素膜的检测线（T）上，兔抗猪瘟抗体包被在硝酸纤维素膜的质控线（C）上，用胶体金标记的猪瘟抗原干燥后置于玻璃纤维素膜下端。当血清加入加样孔内，由于层析的原理，血清开始沿纸条移动，当遇上干燥的金标抗原，将其溶解，并带着金标抗原继续往上移动，至硝酸纤维素膜的检测线。如果样品中有猪瘟抗体存在时，会与玻璃纤维素上的金标猪瘟抗原和包被在检测线上的猪瘟抗原，在检测上形成一个夹心的免疫复合物，呈一条紫红色线。样品中的抗体越高，色线颜色越深，判定为阳性。如果样品中没有猪瘟抗体，检测线（T）线上没有色带出现，判定为阴性。样品和金标抗原继续往上移至质控线时，此处的兔抗猪瘟抗体将会同金标猪瘟抗原结合，在质控线（C）上形成一条紫红色线，证明本试纸有效。整个试验仅需20分钟。操作简便、快速、准确、灵敏度高，直观、结果容易判定。（口蹄疫、伪狂犬、蓝耳病检测原理同猪瘟）

二、用 途：本试纸采用酶联免疫原理和胶体金层析技术制成，用于快速检测猪血液或血清中的抗体，以便快速判断畜禽的免疫状况及时确定猪的合理免疫时间，确保猪的预防免疫效果。本产品具有：1、操作简便：稍作指点任何人员都能进行操作；2、诊断快速：只需2滴血清，20分钟，就可得出结果；3、结果准确：与间接血凝抑制试验（III）免疫吸附试验（ELISA）吻合率高；4、结果直观：只要不是色盲，结果十分容易判断。

三．产品组成：1、检测卡(1个)：由一特制的塑料检测卡将猪瘟抗体检测试纸条夹于卡内，卡面上设有加样孔和观察孔。加样孔作为加入待检血清，观察孔内为试剂检测线（T），试剂质控线（C）。一个检测试剂卡用一个铝箔袋包装，内装干燥剂。2、吸样管　1个； 3、l.5ml样品管 1个； 4、对照卡； 5、使用说明书

　　

四．操作方法：1． 用1.5ml样品管，采血0.5~1ml待检测血清自然析出或用离心机离心10分钟左右，使血清析出。2． 将检测卡平置于桌面上，用吸样管吸取被检血清，在检测卡的椭圆形加样孔内加入2滴约80~100ul。在室温下反应20分钟判定结果。（检测卡如在4℃保存，必须恢复至室温后方可进行检测        加样孔          观察孔

                      S           T      C

五、结果判断：在15-20分钟内判定结果：1、试纸无效：在检测线(T)和质控线(c)处都不出现紫红色线，试纸条视为无效。2、抗体极低或阴性：只在质控区（C）出现一条紫红色线，检测区（T）不出现紫红色线；3、抗体阳性：在检测区（T）和质控区（C）各出现一条紫红色线。根据检测区（T）紫红色线的颜色深浅，就可以判断畜禽抗体水平的高低；1）在检测区（T）出现一条颜色较深的紫红色线，在参照图*效价以上，说明畜禽抗体滴度较高，不需及时进行疫苗免疫；2）在检测区（T）出现一条颜色较浅的紫红色线，说明畜禽抗体效价很低，必须及时接种疫苗。4、关于比照卡的使用以对照图星号(*)处说明，当抗体效价大于或等于此处的效价时，猪只对该病毒攻击具有抵抗力

六．诊断参考：被检样品加样后20分钟可与对照卡的色带滴度进行参考比较。1．当被检样品检测线（T）条带的色泽≥对照卡中猪瘟为1：16[口蹄疫为1：64、伪狂犬为1：40]效价时，说明检测样品中猪瘟（）抗体的滴度较高，暂不需要进行猪瘟疫苗的接种免疫。2．当被检样品检测线（T）条带的色泽＜对照卡中1：16[口蹄疫为1：64、伪狂犬为1：40]效价时，说明检测样品中猪瘟抗体效价不能抵御猪瘟强毒攻击的最低保护滴度，为进行猪瘟疫苗接种时间。3． 当被检样品检测线（T）处无明显色带出现，说明被检测样品中没有猪瘟抗体。如果猪群健康，应当及时进行猪瘟疫苗接种。

七、检测范围：（1）外调种猪须逐个检测，育肥猪10%-15%按比例抽检。（2）自繁种猪检测，猪瘟效价应不低于1：32[口蹄疫为1：128、伪狂犬为1：80]，比例10-20%；（3）仔猪出生首日至5日，测其母源抗体；首免后15-20天，二免后10-15天进行抗体检测，检测比例为3-5%，猪瘟效价不能低于1：16 [口蹄疫为1：64、伪狂犬为1：40]。

八、注意事项：1、试纸条从包装袋取出后应尽快进行试验，谨防吸潮。2、有条件在4摄氏度保存，室温保存也可以。室温下保存有效期一年。

专家建议：疫苗防疫时应配合使用黄芪多糖，黄芪多糖除本身具有增强机体免疫力外，还使疫菌苗的免疫力大大增强，并且对疫菌苗具有很好的保护效果，据研究据道黄芪多糖能增强疫苗的血清拉体效价。黄芪多糖与猪瘟、细小病毒蓝耳病等疫苗联合使用能提高免疫后猪的血清HI抗体效价，中国农业科学院中兽医研究确认黄芪煎剂作为口蹄疫疫苗佐剂，保护率提高20％，故专家建议：畜禽在做疫苗防疫时应配合使用黄芪多糖，做为疫苗保护剂与增效剂。使疫苗作用效价提升快，效价水平高，且群体效价水平整齐。黄芪多糖剂型及用量：1、黄芪多糖1：20提取物，猪0.5-1.0g，2、黄芪多糖口服液（第四需要）猪3-5ml。

任东晓 13598401167

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这是个好东西，好多厂家在这个，包括H9之类的，而且价格也就每条十元钱左右。